10.16695/j.cnki.1006-2947.2020.04.024
Cyclin G2与LDHA相互作用的鉴定分析
目的 分析细胞周期素G2(cyclin G2)与乳酸脱氢酶A(LDHA)之间的相互作用及其意义.方法 将LDHA全长cDNA片段分别克隆到pGEX-5X-1和p3 × FLAG-CMV-14载体上,构建pGEX-LDHA原核重组蛋白表达载体和p3×FLAG-CMV-LDHA真核重组蛋白表达载体,诱导表达并纯化GST-LDHA融合蛋白,通过GST pull-down及western blot技术分析cyclin G2与LDHA的相互作用.分别转染p3×FLAG-CMV-LDHA、pEGFP-FALG-CCNG2质粒到HEK293细胞使其表达,利用带有抗FLAG蛋白标签抗体的免疫沉淀凝胶进行Co-IP实验,进一步验证cyclin G2与LDHA的相互作用.结果 成功构建了pGEX-LDHA原核重组蛋白表达载体和p3×FLAG-CMV-LDHA真核重组蛋白表达载体.GST pull-down实验证实了cyclin G2与LDHA在细胞外的相互作用.Co-IP实验证实了cyclin G2和LDHA在细胞内的相互作用.结论 cyclin G2与LDHA在细胞内和细胞外能发生相互作用,为研究cyclin G2生物学功能奠定实验基础.
cyclin G2、LDHA、免疫共沉淀、GST pull-down、相互作用
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Q26(细胞生物化学)
国家自然科学基金;辽宁省教育厅项目
2020-09-25(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共5页
466-470