利用CRISPR/Cas9技术构建DOC-1R基因敲除的HEK-293稳转细胞系

摘要：

目的 利用CRISPR/Cas9技术敲除人胚肾(human embryonic kidney cell,HEK-293)细胞中DOC-1R,构建DOC-1R敲除的HEK-293稳转细胞系,用于进一步讨论DOC-1R的生物学功能.方法 根据CRISPR/Cas9设计原则,设计向导RNA(single-guide RNA,sgRNA),构建表达载体,对sgRNA测序并转染包装HEK-293T收集上清液测定病毒滴度.前期用Cas9-puro慢病毒感染HEK-293,用已制备的DOC-1R慢病毒感染稳转Cas9的HEK-293,72 h后显微镜下观察HEK-293表达红色荧光蛋白,并用Western blot检测HEK-293中DOC-1R的表达以确定沉默效果.结果 测序显示插入的sgRNA序列正确,表达载体成功构建,显微镜下观察到,90％以上HEK-293表达红色荧光蛋白,HEK-293中DOC-1R蛋白表达减少,确定了DOC-1R敲除效果最明显的序列为GCCTACCTATGCTGGCAGCA.结论 利用CRISPR/Cas9技术成功构建DOC-1R基因敲除的细胞系,为进一步研究该基因的功能奠定了基础.

关键词：DOC-1R、基因敲除、CRISPR/Cas9技术、慢病毒

所属期刊栏目：26

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;辽宁省高等学校基本科研项目

在线出版日期：2020-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：339-342