DOC-1R基因重组表达载体构建及其在HeLa细胞中的表达

摘要：

目的 构建人DOC-1R基因重组逆转录病毒表达载体,实现该基因在体外培养细胞中的大量表达,从而研究表达蛋白的功能.方法 通过重组技术将含有FLAG标签序列的DOC-1RcDNA编码区全长克隆至逆转录病毒载体pLXSN,菌落PCR鉴定、限制性内切酶双酶切及测序验证重组载体的构建.将重组载体转染至GP-293细胞进行病毒包装并以所包装的病毒感染HeLa细胞,通过Western blot及间接免疫荧光染色检测重组DOC-1R蛋白的表达及细胞内定位.结果 测序结果表明重组载体中插入的重组片段序列及开放阅读框架正确,逆转录病毒表达载体pLXSN-FLAG-DOC-1R成功构建.Western blot及间接免疫荧光染色结果证实,逆转录病毒介导的重组DOC-1R蛋白在HeLa细胞中高效表达,表达效率明显高于真核表达载体介导的重组蛋白表达.结论 DOC-1R基因逆转录病毒表达载体成功构建,重组蛋白在体外培养细胞正确高效表达.

关键词：DOC-1R、逆转录病毒表达载体、外源表达、转染

所属期刊栏目：18

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目81100419,30971164;辽宁省教育厅创新团队项目2008T194

在线出版日期：2012-11-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：427-430,434