CD146基因重组质粒的构建及蛋白表达

摘要：

目的 构建CD146原核、真核表达载体,证实融合蛋白在原核细胞的诱导表达以及在胃癌细胞内的表达和定位.方法 提取人黑色素瘤细胞A875的总mRNA并进行反转.以反转录的cDNA为模板PCR扩增CD146全长编码基因,分别克隆至pCDNA3.1-myc/his以及pGEX-4T-3表达载体中.原核重组质粒鉴定后转入BL21细胞中并经了诱导表达及纯化,真核表达质粒转入胃癌MKN45细胞中,分别利用western blot和激光共焦扫描显微技术检测了重组质粒的表达以及在胃癌细胞中的定位.结果 CD146全长基因序列克隆到原核、真核表达载体中,酶切鉴定片段为1930 bp.原核诱导出了GST-CD 146并进行了纯化,CD146在真核细胞中表达为113KD的糖蛋白,Western blot检测到真核转染的myc/his-CD146表达,条带约为120KD,免疫荧光显示蛋白定位在胃癌MKN细胞膜.结论 成功构建了CD146原核、真核表达载体,融合蛋白在胃癌MKN45细胞表达.

关键词：CD146、蛋白质印迹、融合蛋白、免疫荧光、胃癌

所属期刊栏目：18

分类号：Q257;R735.2(细胞生理学)

资助基金：辽宁省自然科学基金资助项目20082097

在线出版日期：2012-10-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：205-207,211