海洋源金属硫蛋白毕赤酵母重组菌株的构建及其表达活性研究

摘要：

为实现海洋源金属硫蛋白的高效表达.将酵母表达载体pPICZαA-SUMO-OpMT通过电转化法转入毕赤酵母菌GS115中,利用博来霉素质量浓度梯度筛选,在耐受高质量浓度(4.0 mg/mL)博来霉素的YPD平板上筛选得到阳性高拷贝GST115/pPICZαA-SUMO-OpMT重组酵母菌株,进一步通过MMH和MDH平板筛选得到2株甲醛利用型(Mut+型)重组酵母菌株.SDS–PAGE电泳和Western blotting显示诱导表达的融合蛋白SUMO-OpMT分子量约23 kD,与预期一致,说明可溶性融合蛋白SUMO-OpMT在重组酵母菌中得到了表达.同时,HPLC检测重组毕赤酵母菌发酵液,结果也表明重组毕赤酵母菌成功表达了可溶性目的蛋白OpMT.通过对重组工程菌中MT活性检测发现,其对重金属镉耐受力增强,说明重组工程菌成功表达出有活性的金属硫蛋白.为天然高效重金属生物解毒剂的成功开发和推广提供理论依据.

关键词：毕赤酵母菌、海洋源金属硫蛋白、高效表达

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资助基金：福建省科技计划项目2017 N0016;国家海洋局第三海洋研究所基本科研业务费专项资金资助项目海三科2016031;厦海职院 KYZY201807 项目共同资助

在线出版日期：2018-10-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：10-14,30