黑木耳内切葡聚糖酶基因克隆与原核表达

摘要：

克隆了黑木耳(Auricularia auricular-judae)内切葡聚糖酶(endoglucanase)基因并进行序列分析,此外,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达.研究基于前期测得的黑木耳转录组数据,同时结合基因组数据(Gen-Bank登录号为NEKD00000000.1),筛选到黑木耳内切葡聚糖酶基因序列并设计特异引物,以黑木耳菌丝总RNA为模板,采用RT-PCR技术克隆黑木耳内切葡聚糖酶基因cDNA全长,命名为Aa-eg,构建了重组原核表达载体pET32a-Aa-eg并成功在大肠杆菌中表达.序列分析表明,cDNA全长为1242 bp,编码413个氨基酸,预测该蛋白分子量为43.59 ku,理论等电点为4.42,存在信号肽.由于pET-32a载体包含20.0 ku的标签,SDS-PAGE分析在45.0 ku和66.2 ku之间出现目的蛋白条带,与理论预期值大小一致.通过对黑木耳内切葡聚糖酶基因的克隆及分析,为进一步揭示黑木耳内切葡聚糖酶基因功能奠定基础.

关键词：黑木耳、内切葡聚糖酶、基因克隆、生物信息学分析、原核表达

所属期刊栏目：41

分类号：S646.6;Q78

资助基金：中央高校基本科研业务费专项资金项目2572017CF01

在线出版日期：2019-07-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：308-315