约翰氏不动杆菌冷休克蛋白的多克隆抗体制备

摘要：

构建稳定表达约翰氏不动杆菌2种CspE家族冷休克蛋白(Csp3、Csp4)的原核表达载体,用冷休克蛋白Csp3、Csp4免疫新西兰兔,制备低温条件下约翰氏不动杆菌关键冷休克蛋白的特异性多克隆抗体.利用PCR技术扩增csp3、csp4目的基因片段,回收目的片段克隆至pET32a表达载体,经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE检测融合蛋白的表达情况,使用镍金属作为螯合亲和层析介质纯化融合蛋白,并将其用于免疫新西兰兔,在第4次免疫的2周后采集血清,利用Western Blot检测多克隆抗体的特异性及约翰氏不动杆菌关键冷休克蛋白的表达情况.结果表明:利用目的蛋白作为抗原制备的多克隆抗体能有效检测关键冷休克蛋白Csp3和Csp4的表达情况,可为进一步探究约翰氏不动杆菌在低温条件下关键冷休克蛋白的表达及机制研究奠定基础.

关键词：冷休克蛋白、融合表达、纯化、Western Blot

所属期刊栏目：40

分类号：S852.43(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目41877136;吉林大学“大学生创新创业训练计划”创新项目2017A85386

在线出版日期：2018-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：628-632