大豆TAIL-PCR反应体系的优化

摘要：

热不对称交错PCR(TAIL-PCR)是检测转基因作物目的基因插入位点的主要技术.为探索适宜大豆的TAIL-PCR反应体系,采用单因素试验和L16(45)正交试验对影响转基因大豆TAIL-PCR的主要参数进行分析,以期建立成熟的大豆TAIL-PCR技术体系.试验设计3个嵌套特异性引物和5种兼并引物进行了3次巢式的热不对称PCR反应.结果表明:退火温度、酶用量、模板浓度、兼并引物和较低温特异性循环在不同水平对TAIL-PCR反应结果均有影响,优化的TML-PCR反应体系,即第2次反应为退火温度61℃,1.0 U/30 mL Taq酶,模板浓度30 ng/μL;第3次反应为退火温度62℃,0.5 U/50mL Taq酶,模板浓度40 ng/μL,反应过程中采用降低5个较低温特异性循环,兼并引物采用AD3,在此条件下扩增的条带清晰、稳定、特异性好,适合大豆TAIL-PCR反应体系.

关键词：大豆、TAIL-PCR、反应体系

所属期刊栏目：40

分类号：S565.1;Q78(经济作物)

资助基金：国家自然科学基金项目30971805;转基因生物新品种培育重大专项2011ZX08004-004

在线出版日期：2018-08-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：190-197