一株大肠埃希菌烈性噬菌体ΦTRI-1的分离及特性分析?
通过在E. coli菌液中加入土壤悬浮液共培养获得噬菌体,利用双层平板法反复纯化4次后得到单一清晰的噬菌斑。将单个噬菌斑加入对数早期的E. coli菌液中增殖培养后利用核酸抽提试剂盒提取总核酸,并分别用DNaseⅠ和RNaseA对总核酸进行消化,利用限制性内切酶HindⅢ和EcoRⅠ对其进行酶切;增殖后的噬菌体液进行噬菌体颗粒浓缩,取浓缩液负染后置于电子显微镜下确定噬菌体的形态特征,并进行SDS-PAGE电泳分析,确定其蛋白条带;同时测定其他生物学特性,包括滴度、最佳感染复数、一步生长曲线以及其对温度、pH、紫外线、氯仿的敏感性等。结果表明:分离并纯化出1株E. coli烈性噬菌体,命名为ΦTRI?1,形态特征:头部为二十面体的立体对称,直径约为60 nm,有一长尾,长约200 nm;其核酸属于双链DNA,按照国际病毒分类委员会分类标准,其属于有尾噬菌体目( Caudovirales),长尾噬菌体科( Siphoviridae)的烈性噬菌体。生物学特性测定结果显示ΦTRI?1对E. coli的最佳感染复数为0?1,潜伏期约为20 min,爆发期约为60 min,裂解量约为38;ΦTRI?1在40℃时活性最高,在20~70℃活性均较强,80℃时活性丧失;其酸碱耐受力较强,在偏碱环境下活性相对更高;对紫外线有一定的耐受能力;对氯仿敏感,浓度5%的氯仿即可致其失活。分离到的噬菌体属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科,综合其各项生物学特性可知其潜伏期短,裂解能力强,环境适应能力强,具有很好的杀菌效果,具有开发为抗E. coli菌剂的潜力。
Escherichia coli、噬菌体、分离、烈性、生物学特性
R378.21(医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学))
国家烟草专卖局科技项目110200902065;云南省烟草公司科技项目2013YN37;湖北省烟草公司科技项目027Y2013-006
2015-11-16(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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