弓形虫MAPK1基因的克隆与原核表达?

摘要：

为获取具有生物学活性的弓形虫MAPK1蛋白，根据GenBank中编码MAPK1的已知序列设计并合成1对引物，用NCoⅠ和HindⅢ双酶切后，连接到同样双酶切的原核表达载体PET?28a上，构建重组表达质粒PET?28a?MAPK1并转化至E．coli BL21感受态，用IPTG诱导表达，表达产物用Ni2＋螯合柱亲和纯化，纯化后进行SDS－PAGE和 Western blotting分析。结果表明：表达质粒在E．coli BL21中得到表达，克隆的MAPK1基因与GenBank中收录的基因序列同源性为99?9％。对重组质粒进行酶切鉴定，获得1599 bp大小的目的基因片段，与预期结果相符，成功地构建了重组质粒PET?28a?MAPK1。Ni2＋螯合柱纯化后蛋白浓度为0?26 mg／mL，可用作免疫原，经SDS－PAGE电泳显示PET?28a?MAPK1融合蛋白的分子量约为58 ku。 Western blotting显示融合蛋白具有良好的抗原性。

关键词：弓形虫、MAPK1基因、克隆、原核表达

分类号：S852.72(动物医学（兽医学）)

资助基金：吉林省重点科技公关项目20140404068NY;国家自然科学基金项目31372430

在线出版日期：2015-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：221-225,236