一种大肠杆菌噬菌体新裂解酶的表达与活性检测?
前期分离得到1株具有较强裂解能力的大肠杆菌噬菌体vB_EcoM?ep3。测序后发现,噬菌体vB_EcoM?ep3的裂解酶基因在大肠杆菌噬菌体中尚未报道,能够编码一种新的裂解酶,并与绿脓杆菌噬菌体裂解酶具有很高同源性。为了探讨该裂解酶对大肠杆菌和绿脓杆菌的裂解活性,克隆了vB_EcoM?ep3的裂解酶基因,经原核表达和纯化,体外评价了Lysep3裂解活性。结果表明:克隆裂解酶基因Lysep3长为492 bp;表达蛋白分子质量为17?7 ku;裂解酶单独作用时,对大肠杆菌和绿脓杆菌均不能裂解,但是能够显著抑制生长;与柠檬酸配合使用(0?5 mg/mL终浓度的Lysep3和0?5 mmol/L终浓度的柠檬酸),对大肠杆菌和绿脓杆菌均表现出较好的裂解能力,作用从2~24 h持续有效,细菌数量分别下降7?2倍和17?3倍。该结果表明,vB_EcoM?ep3的裂解酶不但在基因序列上与绿脓杆菌存在进化关系,在功能上也具有相关性。该研究为解析裂解酶结构与功能的关系提供了一个良好的例证,同时有助于裂解酶的广谱性改造。
噬菌体裂解酶、大肠杆菌、绿脓杆菌、原核表达
S852.6(动物医学(兽医学))
国家重点基础研究发展计划项目2013CB127205
2015-05-18(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共6页
211-215,220