鹿结核病流行株与卡介苗差异基因原核表达质粒的构建及表达?

摘要：

以吉林农业大学经济动物疾病实验室保存的鹿体内分离并鉴定的结核病流行株的基因组为模板，应用PCR方法从已构建的鹿结核病野毒株与卡介苗差异基因文库中扩增RD1区的Rv3872、Rv3873、Rv3874、Rv3875和Rv38785段目的基因，分别与pMD18?T Simple Vector连接，经PCR、酶切鉴定后的阳性重组克隆质粒与原核表达载体pGEX?4T?1连接并进行原核表达，采用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析方法对目的蛋白进行纯化，通过SDS－PAGE和Western blot对表达产物的反应原性进行初步研究。基因测序结果显示差异基因与期望的序列一致，并在大肠杆菌中成功诱导表达，获得以可溶形式表达的目的蛋白，经SDS－PAGE分析目的蛋白的相对分子量与理论值相符，经Western blot鉴定纯化好的目的蛋白能与鹿结核病的阳性血清发生反应，具有良好的反应原性，为其在鹿结核病血清诊断学中的应用奠定了试验基础。

关键词：鹿、结核病、差异基因、原核表达、反应原性

分类号：S852.618(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技支撑计划项目2011BAI03B02-1;国家自然科学基金项目31072140;吉林省科技发展计划项目20120225，20125067

在线出版日期：2015-01-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：707-712