野生型、超突变子大肠杆菌PFGE分型及大肠杆菌超突变子发生的分子基础

摘要：

采用长片段PCR、Western-blotting、质粒互补试验对大肠杆菌野生型和超突变子的MMR重要组分MutS进行了研究。为测定mutS可能的缺失，参照fhlA-mutS-rboS基因簇，在mutS的两侧及中间设计3对引物进行长片段PCR扩增，以K12为模式菌株，其mutS各片段与预期的大小相同，3条片段长度分别为12045，10668，8477 bp；超突变子CE3101和CE5116与 K12相比，3条片段均存在不同程度的缺失：第1条带分别缺失约3500 bp和7000 bp；第2条带分别缺失约3600 bp和7400 bp；第3条带分别缺失约2500 bp和7500 bp。采用Western-blotting方法对大肠杆菌K12、正常菌株、超突变子的MutS蛋白检测结果表明，大肠杆菌K12的条带最为清晰，MutS蛋白最为完整；其次为 CE1112、CE1305、CE2219、CE2307，条带较为清晰，MutS蛋白较为完整；CE5103、CE5120条带较为模糊，CE2205只有1条微弱的条带，MutS 蛋白不完全完整；而超突变子 CE3101、CE5116几乎没有条带，MutS蛋白不完整。以pBR322质粒对照，采用pBR322构建的mutS＋的pGW1811质粒进行质粒互补试验，CE1117、CE3101、CE1305、CE5116、CE6107、CE2313、CE7301、K12等8株菌株转化成功。转入pGW1811前后各株大肠杆菌对利福平（RIF）的突变频率及抑制率测定表明，菌株 CE1117、CE1305、CE6107、CE2313及K12在转入pGW1811前后对RIF的突变频率变化不大（40％）；而突变子CE3101、CE5116、CE7301在转入pGW1811前后对RIF的突变频率变化较大（＞95％）。以上试验结果表明，与野生型大肠杆菌相比，超突变子大肠杆菌的MutS均存在缺陷，说明大肠杆菌超突变子发生的分子基础是其MMR系统重要组分MutS存在缺陷。

关键词：大肠杆菌、超突变子、分子基础

分类号：S852.612(动物医学（兽医学）)

资助基金：公益性行业农业科研专项201203040;吉林省畜牧业管理局牧业科研育种专项20120113

在线出版日期：2014-06-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：183-189