p58IPK基因RNA干扰载体的构建及鉴定
针对p58IPK基因设计2个靶位点,并根据靶位点合成2对寡聚核苷酸序列,退火后连接到经 BglⅡ和HindⅢ双酶切的pSUPER载体上,分别构建抑制p58IPK蛋白基因表达的p58IPK-siRNA1和p58IPK-siRNA2载体并鉴定其功能。重组构建的pSUPER-p58IPK载体经酶切鉴定及基因序列分析,结果表明60个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致。将构建的2个RNAi载体分别转染到293T细胞中,通过Real-time PCR和Western blotting的方法检测其对p58IPK的抑制效果,结果证明p58IPK-siRNA2可显著抑制细胞中p58IPK基因的表达,可为进一步研究p58IPK在禽流感病毒感染中的作用机制奠定基础。
p58IPK、pSUPER载体、RNA干扰、Real-time PCR
S852.65;Q78(动物医学(兽医学))
国家重点基础研究发展计划项目“973”计划2012CB518900
2014-02-27(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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