单核增生性李氏杆菌溶血素的原核表达及可溶性分析

摘要：

对单核增生性李氏杆菌的主要毒力基因hlyA进行大肠杆菌原核表达,分析其表达蛋白的可溶性并纯化.根据hlyA基因设计特异性引物,细菌煮沸破裂提取基因组,PCR扩增出目的条带.连接转化至克隆载体pMD18-T,测序正确后连接表达载体pET-30a(+),酶切和PCR鉴定正确后转化至BL21 (DE3),构建重组质粒pET-30a-hlyA.IPTG诱导表达蛋白,并分析其可溶性.PCR扩增的hlyA基因全长约1600 bp,成功构建了重组质粒pET-30a-hlyA,转化大肠杆菌诱导表达了溶血素蛋白,SDS- PAGE分析表达产物,结果显示表达的蛋白分子量约为60kD,以可溶性和包涵体2种形式存在,且以可溶性为主要形式.成功克隆和表达了单核细胞增生性李氏杆菌hlyA基因和溶血素蛋白,并得到纯化蛋白.

关键词：单增李氏杆菌、溶血素、hlyA基因、原核表达、可溶性蛋白

所属期刊栏目：34

分类号：S85(动物医学（兽医学）)

资助基金：公益性科研院所基本科研业务费专项资金BRF090402

在线出版日期：2012-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：189-193