大蒜蒜氨酸酶基因克隆与序列分析及毕赤酵母表达质粒的构建

摘要：

根据GenBank登录的蒜氨酸酶序列(S73324)设计上下游引物,利用RT-PCR技术从浙江大蒜鳞茎中扩增蒜氨酸酶基因,获得了长度为1 523 bp的cDNA序列,提交GenBank(登录号: FJ786257,命名为浙江蒜氨酸酶).利用生物信息学相关软件对该序列进行同源性比较、进化分析、蛋白质的结构和酶活性中心预测,引用pPICZaC载体构建蒜氨酸酶毕赤酵母真核表达重组质粒.结果表明:浙江蒜氨酸酶与其他葱属植物如大蒜、洋葱、冬葱、火葱和细香葱蒜氨酸酶具有高度同源性,进化关系比较接近,目的基因可以成功构建到毕赤酵母表达载体.浙江蒜氨酸酶三维结构呈树枝状,蛋白质分子的N端含有一个类似表皮生长因子结构域,酶的中心含一个天冬氨酸氨基转移酶超家族结构域;蛋白质结构中Lys-277可能是磷酸吡哆醛的结合位点,Lys-277周围区域可能是酶活性中心部位.重组质粒经鉴定构建正确.

关键词：蒜氨酸酶、大蒜、克隆、序列分析、毕赤酵母

所属期刊栏目：32

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：浙江省教育厅资助项目Y200805242;浙江中医药大学校级重点资助项目2009ZZ05

在线出版日期：2010-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：258-263,283