猪血凝性脑脊髓炎病毒HE基因的克隆及真核表达
应用特异性引物,从猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)中扩增出HE蛋白基因,PCR产物纯化后克隆入pGEM-T载体,得到重组质粒pTHE.用EcoRI和Not I双酶切pTHE,回收目的基因HE片段并将其定向克隆到pPICZáA中,构建重组质粒pHCZáA HE.用BstXI酶切pPICZáA HE使其线性化,并电击转化至感受态毕赤酵母细胞GS115.PCR法鉴定阳性重组子,用1%甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western blot分析.结果在酵母菌培养基上清中检测到相对分子量为43 kD的重组蛋白,且该重组蛋白可与HEV多克隆抗体发生特异性血清学反应,表明HEV的HE蛋白片段在Pichia Pastoris中获得成功表达.
血凝性脑脊髓炎病毒、HE蛋白、克隆、表达
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Q78;S852.65(基因工程（遗传工程）)
国家自然科学基金项目30671551;吉林省科技发展计划重点项目20060206-2
2009-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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