猪A组轮状病毒Vp7基因与双标记表达载体pW425et的重组及在大肠杆菌中的表达

摘要：

以猪A组轮状病毒mRNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,扩增了981 bp的Vp7基因,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T载体中,构建出克隆质粒pGEM-T-Vp7.以Sac Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切pGEM-T-Vp7及双标记表达载体pW425et,并将纯化的Vp7基因亚克隆至双标记表达载体pW425et中,构建出可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的原核表达重组质粒pW425et-Vp7.将pW425et-Vp7转化至thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态Escherichia coli X13中,经生长功能弥补筛选阳性克隆和SDS-PAGE分析,可见约40 kD的融合蛋白.Western blot分析表明该蛋白具有与猪轮状病毒多克隆抗体的反应原性.

关键词：轮状病毒、Vp7基因、表达载体、大肠杆菌、表达

所属期刊栏目：30

分类号：Q786;S852(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2003AA24112002;国家自然科学基金30201999;30671573

在线出版日期：2008-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：84-88