流产布鲁氏菌BCSP31基因在大肠杆菌中的可溶性高效表达

摘要：

设计1对引物,突变除去布鲁氏菌BCSP31(细胞表面蛋白31)基因的N端信号肽氨基酸序列,经Not Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切后与相同处理的表达载体pGEX-4T-1连接,转化BL21(DE3)感受态细胞.酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性克隆,测序证明其阅读框完全正确.用IPTG诱导表达构建成功的阳性克隆,对产物进行SDS-PAGE和Western-blotting检测,发现表达产物出现预期分子量57 kD的融合蛋白,该蛋白能与牛流产布鲁氏菌阳性血清发生反应,进一步证明目的蛋白主要以可溶性形式存在,表达量约占总蛋白的40%,应用GST琼脂糖凝胶FF纯化可得到纯度较高的表达产物.

关键词：流产布鲁氏菌、BCSP31基因、克隆、可溶性表达

所属期刊栏目：29

分类号：S852.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家奶业重大专项基金2002BA518A04;国家支撑计划2006BAD04A05

在线出版日期：2008-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：683-686