坏死梭杆菌白细胞毒素基因BSBSE片段的克隆及原核表达

摘要：

以牛源坏死梭杆菌FNn株为试材,根据GenBank上已发表的坏死梭杆菌AF312861标准菌株的lktA序列设计1对引物,利用PCR技术扩增出1 131 bp的坏死梭杆菌白细胞毒素BSBSE基因.将PCR产物插入pGEM-T Easy vector中,经双酶切鉴定正确后进行序列测定.分析表明该BSBSE序列与GenBank上已发表的坏死梭杆菌AF312861标准菌株的lktA序列的核苷酸同源性为99%,推导出的氨基酸序列同源性为98%.为研究BSBSE的免疫原性,构建了原核表达载体pMAL-p2X-BSBSE,用IPTG诱导在大肠杆菌中表达.结果表明,BSBSE基因在大肠杆菌中进行了高效特异性融合表达,融合蛋白分子量约为84.5×103,其中41.5×103为BSBSE基因表达的蛋白质,43.0×103为MBP融合标签,Western-blotting检测表明该表达产物有免疫原性.

关键词：坏死梭杆菌、白细胞毒素、BSBSE、克隆、表达

所属期刊栏目：29

分类号：Q78;S852.61(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家科技攻关计划2002BA518A04;中国农业科学院科研项目Tcs 2005-03

在线出版日期：2007-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：568-571