一链双靶siRNA对皮肤鳞状细胞癌NET-1和Survivin基因表达及增殖和凋亡的影响研究

摘要：

目的:探讨一链双靶siRNA对人皮肤鳞癌细胞株(A431)NET-1和Survivin基因的抑制作用以及对细胞增殖、凋亡的影响.方法:构建siRNA NET-1、siRNA Survivin以及同时靶向NET-1和Survivin基因的一链双靶siR-NA.采用免疫共沉淀法检测NET-1和Survivin蛋白在A431人皮肤鳞癌细胞中的相互作用.将A431细胞分为siRNA-NET-1组、siRNA-Survivin组、siRNA-NET-1&Survivin组、siRNA-NC组和control组,分别进行细胞转染.qRT-PCR和Western Blot法分别检测细胞内NET-1、Survivin mRNA和蛋白表达,细胞免疫荧光法观察NET-1、Sur-vivin蛋白在细胞内的表达及定位.CCK-8法和流式细胞仪分别检测细胞增殖与凋亡情况.结果:免疫共沉淀法证实NET-1和Survivin蛋白有相互作用.qRT-PCR和Western Blot结果显示,siRNA-NET-1&Survivin组、siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组细胞中NET-1和Survivin mRNA和蛋白表达水平均低于siRNA-NC组及control组,siRNA-NET-1&Survivin组低于siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组,差异均有统计学意义(P<0.05).CCK-8法检测显示,siRNA-NET-1&Survivin组、siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组细胞增殖水平低于siRNA-NC组和control组,siR-NA-NET-1&Survivin组低于siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组,差异均有统计学意义(P<0.05).流式细胞仪检测显示,siRNA-NET-1&Survivin组、siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组细胞凋亡率高于siRNA-NC组和control组,siRNA-NET-1&Survivin组高于siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组,差异均有统计学意义(P<0.05).细胞免疫荧光显示,siRNA-NET-1&Survivin组、siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组NET-1和Survivin蛋白表达阳性细胞百分率低于control组,siRNA-NET-1&Survivin组低于siRNA-NET-1和siRNA-Survivin组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:NET-1和Survivin蛋白存在相互作用,靶向NET-1和Survivin的一链双靶siRNA能同时下调A431细胞NET-1和Survivin基因表达,并能抑制A431细胞增殖,促进细胞凋亡,一链双靶siRNA作用效果优于单靶siRNA.

关键词：NET-1、Survivin、一链双靶siRNA、A431、RNA干扰、皮肤鳞状细胞癌

所属期刊栏目：37

分类号：R739.5(肿瘤学)

资助基金：南通市基础研究计划项目JC12022018

在线出版日期：2023-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：14-19,23