VEGF和Smad7双基因过表达慢病毒载体的构建

摘要：

目的:构建过表达VEGF和Smad7双基因的慢病毒载体,为勃起功能障碍基因治疗的研究提供有效工具.方法:根据GenBank中基因信息,设计合成VEGF和Smad7引物,采用overlap PCR方法扩增目的基因片段,运用基因重组技术将其克隆至慢病毒表达载体Ubi-MCS-3FLAG-CBh-gcGFP-IRES-puromycin,经酶切、测序对重组质粒进行验证.将重组质粒和Helper1.0、pHelper2.0辅助质粒共转染293T细胞,包装双基因过表达慢病毒并测试其滴度.结果:经酶切和测序鉴定表明VEGF和Smad7双基因重组慢病毒载体构建成功,荧光法测定重组慢病毒滴度高(2E+8TU/mL).VEGF和Smad7重组慢病毒能高效转染293T细胞,Western blot检测显示VEGF和Smad7蛋白在靶细胞中过表达.结论:成功构建了携带VEGF和Smad7基因并能正确表达的高滴度的重组慢病毒载体.

关键词：血管内皮生长因子、Smad7、慢病毒载体、勃起功能障碍

所属期刊栏目：33

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目81771571

在线出版日期：2019-06-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：107-110