pErk1/2在干扰素-γ对干扰素调节因子-1沉默后表达Akt的32D细胞生长中的作用
目的：运用siRNA沉默干扰素调节因子-1（IRF-1）基因，观察干扰素-γ（IFN-γ）对IRF-1沉默后表达Akt的32D细胞生长增殖的作用，探讨IFN-γ由抑制造血逆转为促进造血的机制。方法：培养表达野生型Akt与无活性型Akt的32D细胞并分别转染，针对IRF-1-siRNA质粒以沉默IRF-1基因，用实时定量聚合酶链反应检测沉默效果，Western-blotting检测IRF-1蛋白表达以验证沉默效果。将处于对数生长期的两株细胞分成3大组：siRNA干扰组、空质粒阴性对照组及空白对照组，前两组分别加入不同浓度的IFN-γ共孵育，用MTS法检测两株细胞增殖情况。用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率；用Western-blotting检测p-Erk1/2表达。结果：（1）加IFN-γ24h后，IRF-1沉默组在IFN-γ低浓度时促进增殖，抑制凋亡。高浓度的IFN-γ仍抑制增殖，促进凋亡。在48h以后IRF-1沉默组各浓度的IFN-γ都促进增殖，抑制凋亡（P＜0.05）。（2）表达野生型Akt的32D细胞在各时间点的增殖比例都大于表达无活性型Akt的细胞。且凋亡率都小于表达无活性型Akt的各组细胞，两者在48h比较差异有统计学意义（P＜0.05）。（3）表达无活性型Akt的32D细胞，加入IFN-γ后各组均上调了pErk1/2的表达（P＜0.05）。但IRF-1沉默前后，各组pErk1/2表达量比较差异无统计学意义（P>0.05）。表达野生型Akt的32D细胞，在IRF-1沉默后各浓度IFN-γ均下调pErk1/2的表达（P＜0.05）。结论：（1）IRF-1在IFN-γ的促凋亡作用中起重要作用。（2）有活性Akt的表达可抑制Erk信号通路，其活性状态决定了IRF-1封闭后IFN-γ对pErk1/2表达的作用，pErk1/2的表达影响细胞增殖与凋亡，但并不决定IFN-γ作用的逆转。（3）Akt信号通路在IFN-γ逆转机制中起作用。
再生障碍性贫血、Akt、干扰素调节因子-1、基因沉默、干扰素-γ、pErk1/2、实时定量聚合酶链反应、Western blot检测、流式细胞仪检测、小鼠
R556.5(血液及淋巴系疾病)
国家自然科学基金81070400；江苏省医学创新团队与领军人才项目LJ201136；南通市科技项目HS2013067。
2015-04-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
7-11,15
