酪氨酸羟化酶重组质粒标准品构建

摘要：

目的:用T-A克隆法构建含酪氨酸羟化酶(TH)基因的重组质粒,并用实时定量PCR(RQPCR)方法制备标准品.方法:提取小鼠肾上腺髓质组织总RNA,逆转录为cDNA后进行RT-PCR,回收纯化电泳胶,T-A克隆与pGEM-T载体连接,转化Top-10感受态细菌,蓝白斑筛选出阳性菌落后,大量提取质粒,再进行RQPCR反应,最后制得含TH的重组质粒标准品.结果:肾上腺髓质TH的表达,PCR扩增,菌液PCR,测序鉴定均证实TH重组到pGEM-T载体上,经RQPCR定量后得到TH重组质粒标准品的标准曲线.结论:该方法能大量制备TH质粒标准品,并且可推广应用.

关键词：酪氨酸羟化酶、pGEM-T载体、T-A克隆法、实时定量聚合酶链反应

所属期刊栏目：24

分类号：Q55(酶)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30870929;南通市应用研究计划K2008006,K2008019

在线出版日期：2010-12-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：463-465