人低氧诱导因子1α真核表达质粒的构建和鉴定

摘要：

目的:构建人低氧诱导因子1α(HIF-1α)真核表达质粒及其在人肝癌细胞(HepG2)的表达.方法:从HepG2细胞中提取总RNA,通过RT-PCR逆转录,获得HIF-1α的cDNA,双酶切后构建真核表达载体pcDNA3.1(+),测序验证碱基序列.用脂质体法将质粒pcDNA3.1(+)-HIF-1α转染至HepG2,以免疫荧光和Western Blot法分别对转染细胞进行HIF-1α表达分析.结果:扩增出HIF-1α全长cDNA,构建真核表达质粒,测序结果正确.经检测的质粒转染至HepG2细胞后,HIF-1α蛋白水平高于转染空载细胞.结论:成功构建人HIF-1α基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-HIF-1α,并证明其能在HepG2细胞内表达.

关键词：低氧诱导因子1α、真核表达、质粒构建

所属期刊栏目：23

分类号：R364.4(病理学)

资助基金：国家自然科学基金30770806;江苏省普通高校研究生科研创新计划项目

在线出版日期：2009-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：119-121,124