基于醇脱氢酶催化-动力学荧光分析法测定食品中乙醇的含量

摘要：

醇脱氢酶(ADH)是生物体内重要的氧化还原催化剂之一,很多醇类代谢都通过醇脱氢酶催化完成.基于以还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)和乙醇为底物,在醇脱氢酶作用下催化转化为无荧光的氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)和乙醛,联合动力学荧光分析法测定食品基质中的乙醇含量.通过三因素四水平正交实验,考察得到最佳反应体系为 20 μL脱氢酶溶液(31600 U·L-1),40μL NAD溶液(0.05 mol·L-1)和pH值 8.4 的Tris-HCl缓冲溶液(0.05 mol·L-1).根据以上体系中还原型NAD(NADH)荧光值的变化计算酶促反应速度,结合米氏方程测定乙醇含量.金属离子、蛋白质、抗坏血酸等添加剂的干扰实验表明,酶对催化反应具有较高专一性,可以通过EDTA等有效避免,该方法在 1.0～5.0 mmol·L-1 有较好的线性,加标回收实验回收率在 96%～104%.该方法具有较高灵敏,较低检测限,能准确测定生物样品和食品样品中乙醇的含量.

关键词：NADH、醇脱氢酶、酶法测定、动力学荧光法

所属期刊栏目：39

分类号：TS207.3(食品工业)

资助基金：中央高校基本科研业务费专项资金项目C3N4-PMS;CPT22027

在线出版日期：2023-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：52-55