表达大肠杆菌分子伴侣GroEL、 GroES和GrpE载体的构建及其应用

摘要：

大肠杆菌(Escherichia coli)共表达系统常要求质粒具有不同抗生素抗性以及不同的复制子.利用粘性末端PCR技术,以含有大肠杆菌分子伴侣基因GroEL、GroES和GrpE的pR-GESP质粒为模板,设计两对引物,通过两次独立的PCR反应扩增3个基因的多顺反子,将形成粘性末端的PCR产物插入NcoI和XhoI酶切的pACY-CDuet-1质粒,构建的pA-GESP质粒具有p15A复制子及氯霉素抗性,和具有ColE1复制子及卡那霉素抗性表达载体pET28b相容.SDS-PAGE显示含有pA-GESP质粒的大肠杆菌细胞中3个分子伴侣蛋白的表达水平和含有pR-GESP质粒的大肠杆菌细胞没有明显差异,它们对玉米丝氨酸消旋酶的可溶性表达有部分促进作用,但对N端含有组氨酸标签的玉米铁氧还蛋白还原酶的表达没有作用,在三个含有不同抗生素基因的质粒中共表达分子伴侣、5-氨基乙酰丙酸合酶和尿卟啉原Ⅲ甲基化酶,两个酶连续催化的荧光产物在细胞内积累量为562.13±3.17/OD600,而没有分子伴侣的积累量为457.66±4.98/0D600,表明分子伴侣改善部分蛋白在大肠杆菌的可溶性表达和催化功能.

关键词：分子伴侣、大肠杆菌、表达载体、粘性末端PCR技术、蛋白可溶性

所属期刊栏目：21

分类号：Q71(生物大分子的结构和功能)

资助基金：转基因生物新品种培育重大专项2009ZX0810-002B;安徽省攻关课题0701302137

在线出版日期：2012-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：46-51