永瓣藤ISSR-PCR反应体系的建立与优化

摘要：

以永瓣藤基因组DNA为模板,通过单因子、双因子实验研究了ISSR反应体系中主要成分(Mg2+、dNTP、引物、模板DNA、TaqDNA聚合酶)以及热循环参数(退火温度、循环数、变性时间、退火时间、延伸时间)对扩增结果的影响,并找出各自的最适条件,建立了适合永瓣藤ISSR分析的反应体系和扩增程序,即在25 μL反应体系中,内含1×PCR buffer、1.5 mmol/L Mg2+、200 μmol/L dNTP、0.5 μmol/L引物、50 ng 模板、2 U TaqDNA聚合酶.扩增程序为94 ℃预变性5 min,然后进行35个循环:94 ℃变性30 s,复性1 min,72 ℃延伸1 min,循环结束后72 ℃延伸7 min.这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术进行永瓣藤鉴定及种质遗传多样性分析提供了一个标准化程序.

关键词：永瓣藤、ISSR、反应体系、热循环参数

所属期刊栏目：17

分类号：Q341;Q78(遗传学分支学科)

资助基金：安徽省自然科学基金项目050430501;高等学校博士学科点科研基金项目20060370001;安徽省高校自然科学研究重点资助项目KJ2007A092

在线出版日期：2008-12-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：701-706