三套荧光显微成像系统在光敏剂亚细胞定位研究中的应用比较

摘要：

目的:对三套荧光显微成像系统在国产新型光敏剂HMME亚细胞定位研究中的应用特点及适用范围进行了比较与评价.方法:分别应用LSCM、CCD、ICCD荧光显微成像系统,选择特异性细胞器荧光探针Rhodamine-123、DIOC6(3)标记细胞内线粒体和内质网.采用细胞器-细胞荧光强度比值法,对 HMME进行单细胞内分布的定性与定量研究.结果:LSCM和CCD成像系统能采集到浓度达到160 μg/ml时的HMME 的荧光图像, 获得荧光探针图像信息显示所标记的细胞内线粒体和内质网平均荧光强度比值(J1/J2值)都明显高于细胞内J1/J2值.而 ICCD成像系统只需HMME浓度为5 μg/ml,荧光图像特点都呈胞浆中荧光强度较高且分布不均,细胞核区荧光较弱的中空现象.ICCD系统对细胞器探针荧光图像在空间分辨上不理想.结论:LSCM与CCD成像系统限于其探测灵敏度,对于弱荧光性光敏剂,适用于其高孵育浓度条件下的亚细胞定位研究.二者获得的结果相一致:孵育24 h,HMME在鼠肺内皮细胞线粒体和内质网有分布而几乎不进入细胞核.ICCD成像系统可不受孵育浓度条件的限制,实现光敏剂极微弱荧光的有效探测,但空间分辨率较低.

关键词：荧光显微成像、光敏剂、亚细胞定位

所属期刊栏目：14

分类号：Q-336(生物科学的研究方法与技术)

资助基金：中国博士后科学基金60078021

在线出版日期：2005-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：139-144