抑制KDM2A基因对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

摘要：

目的 探讨抑制KDM2A基因对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其可能的调控机制.方法 收集2014-2017年华中科技大学同济医学院附属同济医院收治的40例肝细胞癌(HCC)患者的肝癌组织及其癌旁组织,体外培养人肝癌细胞株HepG2、Huh7、HCCLM3、MHCC-97H及正常肝细胞LO2,采用qRT-PCR及Western blotting检测肝癌组织及细胞中KDM2A mRNA及蛋白的表达情况.取Huh7细胞,设置:(1)si-NC组(转染si-NC)与si-KDM2A组(转染si-KDM2A);(2)mimic-NC组(转染mimic-NC)、miRNA-29a-3p mimic组(转染miRNA-29a-3p mimic)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)与miRNA-29a-3p inhibitor组(转染miRNA-29a-3p inhibitor).采用qRT-PCR和Western blotting检测KDM2A mRNA及蛋白的表达情况,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力.采用在线数据库TargetScan、miRDIP、miRWalk、Starbase及miRDB预测KDM2A与miR-29a-3p的结合位点.将KDM2A 3'-UTR(WT)或KDM2A 3'-UTR(MUT)报告质粒分别与NC-miRNA或miR-29a-3p mimic共转染293T细胞48 h后,采用荧光素酶报告实验检测荧光素酶活性.结果 与癌旁组织相比,肝癌组织中KDM2A mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P＜0.05);与正常肝细胞LO2相比,肝癌细胞HepG2、Huh7、HCCLM3、MHCC-97H中KDM2A mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P＜0.05).与si-NC组比较,si-KDM2A组Huh7细胞增殖、侵袭和迁移能力明显降低(P＜0.05或P＜0.01).在线数据库TargetScan、miRDIP、miRWalk、Starbase及miRDB分析结果显示,miR-29a-3p与KDM2A存在结合位点.双荧光素酶报告实验结果显示,miR-29a-3p mimic可明显降低KDM2A-MUT荧光素酶活性(P＜0.01).过表达miRNA-29a-3p后,Huh7细胞中KDM2A mRNA和蛋白相对表达水平降低(P＜0.01),细胞增殖、侵袭和迁移能力下降(P＜0.05);抑制miRNA-29a-3p的表达后,Huh7细胞中KDM2A mRNA和蛋白相对表达水平升高(P＜0.05),细胞增殖、侵袭和迁移能力增强(P＜0.05).结论 抑制KDM2A的表达可减弱人肝癌细胞Huh7的增殖和转移能力,而miR-29a-3p可能是KDM2A的上游调节因子,可参与肝癌的发生发展.

关键词：KDM2A、miR-29a-3p、肝细胞癌、增殖、侵袭和转移

所属期刊栏目：49

分类号：R73-37(肿瘤学)

在线出版日期：2024-09-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：814-822