抗HBs Fab-IFNα融合蛋白的制备与初步鉴定

摘要：

目的 构建抗HBsAg的pComb Fab-IFNα载体,原核表达具双重生物活性的抗HBs Fab-IFNα融合蛋白.方法 以pBAD-Fab和pBAD IFNα作为模板,分别扩增Fd、λ和IENα基因,经相应的限制性内切酶酶切后分3次克隆人pComBHss质粒,转化XL-1 Blue大肠埃希菌.限制性酶切和测序鉴定重组质粒,免疫蛋向印迹(Western blotting)和斑点印迹(Dot blotting)鉴定融合蛋白的表达及抗原结合活性.结果 重组载体的酶切、电泳及测序表明抗HBs Fab-IFNα基因克隆正确.表达产物经12%SDS-PAGE电泳、转印,Western blotting显示该融合蛋白分子量约为65kD,Dot blotting显示其与HBsAg具有结合能力.细胞病变抑制法测定IFNα生物学活性为7.8×104～5.1×105U/ml.结论 该原核系统成功表达了抗HBs Fab-IFNα融合蛋白,表明其既具有抗HBsAg结合能力,又具备IFNα的生物活性,为进一步的系统表达和应用研究提供了条件.

关键词：免疫球蛋白Fab碎片、干扰素α、肝炎表面抗原、乙型、肝炎病毒

所属期刊栏目：36

分类号：R392.11

资助基金：上海市科委资助项目074119642

在线出版日期：2011-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：467-470