二甲双胍下调ROS-PKCβ2通路对高糖波动加重的人内皮细胞损伤的干预作用
目的 观察波动性高糖与持续性高糖对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管内皮生长因子(VEGF)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)mRNA表达的影响,探讨活性氧(ROS)和蛋白激酶Cβ2(PKCβ2)在其中的作用及二甲双弧的干预作用.方法 将培养的HUVECs分为7组:①正常糖(NG,5mmol/L D-葡萄糖)组,②正常糖空载体转染组(NN,NG+Ad5-null)组,③持续性高糖(SHG,15mmol/L D-葡萄糖)组,④波动性高糖(IHG,5mmol/L D-葡萄糖与25mmol/L D-葡萄糖每24h更换一次)组,⑤波动性高糖+PKCβ2转染(IHGB,IHG+Ad5-PKCβ2)组,⑥波动性高糖+二甲双胍(IHGM,IHG+20/μmol/L二甲双胍)组,⑦波动性高糖+选择性的PKCβ2抑制剂CGP53353(IHGI,IHG+00μmol/L CGP53353)组或波动高糖+α-硫辛酸(ALA)(IHGA,IHG+62.5.μmol/L ALA)组.RT-PCR法检测细胞VEGF、VCAM-1 mRNA表达水平,荧光酶标仪测定细胞ROS水平,激光共聚焦显微镜下检测PKCβ2蛋白表达和转位情况.结果 与NG组比较,NN组的空载体转染对细胞无明显生物学意义(P＞0.05).SHG组和IHG组VEGF、VCAM-1mRNA表达及ROS水平增加,分别为NG组的2.16倍、2.30倍、1.75倍和2.57倍、3.32倍、3.20倍,且IHG组增加更明显(P＜0.05).SHG组和IHG组PKCβ2核转位激活,定量分析显示胞质/胞核荧光强度比值较NG组分别下降了21%和26%,且IHG组下降更加明显(P＜0.05);IHGB组PKCβ2核转位较IHG组更显著,胞质/胞核荧光强度比值为IHG组的75%,同时IHGB组VEGF、VCAM-1 mRNA表达以及ROS水平亦显著增高,分别为IHG组的1.38倍、1.45倍和1.25倍(P＜0.05).IHGM组VEGF、VCAM-1mRNA表达及ROS水平均较IHG组明显降低,为IHG组的44%、53%和39%;IHGM组PKCβ2核转位亦较IHG组减少,胞质/胞核荧光强度比值为IHG组的1.20倍(P＜0.05).结论 波动高糖较持续高糖更易损伤HUVECs,该作用与ROS-PKCβ2活化密切相关;二甲双胍可通过抑制PKCβ2激活,减轻波动性高糖诱导的HUVECs损伤.
蛋白激酶Cβ2、氧化性应激、脐静脉内皮细胞、二甲双胍
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R587.1(内分泌腺疾病及代谢病)
国家自然科学基金30570877
2011-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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