利用PCR方法获得shRNA抑制内外源性基因的表达

摘要：

目的探讨PCR法获得的shRNA对外源性基因和内源性基因表达的抑制效果.方法选择绿色荧光蛋白(GFP)和大鼠肾脏系膜细胞高丰度表达的纤维连接蛋白(FN)分别作为外源性和内源性基因的靶基因,设计特异性引物,利用PCR扩增获得shGFP-RNA和shFN-RNA.前者与pEGFP质粒共转染至293T细胞,48h后进行激光共聚焦检测细胞表达GFP阳性率;后者转染至大鼠系膜细胞(RMC)中,48h后提取总RNA逆转录成cDNA,经real-time RT-PCR检测 FN的mRNA 表达水平,提取细胞总蛋白进行Western blot检测FN蛋白表达水平.结果 PCR获得的shGFP-RNA产物能有效抑制外源性基因GFP的表达,抑制效率可达70%±3.2%;shRNA转染组内源性基因FN的表达水平明显下降,与对照组相比有显著性差异(P<0.05).结论 PCR方法可快速简单、廉价地获得shRNA,对内源性或外源性基因进行特异性抑制.

关键词：RNAi、小分子干扰、聚合酶链反应、纤连蛋白类

所属期刊栏目：30

分类号：R781(口腔科学)

资助基金：国家自然科学基金30370655;国家重点基础研究发展计划973计划G2000057000

在线出版日期：2005-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：800-803