应用抑制性消减杂交技术筛选XTP3的反式激活基因

摘要：

目的应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP3的差异表达的cDNA消减文库,克隆XTP3反式激活相关基因.方法以XTP3表达质粒pcDNA3.1(-)-XTP3转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析. 结果文库扩增后得到30个白色克隆,经菌落PCR分析,得到23个200～1 000bp插入片段.对所得片段测序,并进行同源性分析,共得到20种已知基因序列和2种未知功能基因序列,可能是XTP3反式激活靶基因. 结论成功构建了乙型肝炎病毒XTP3反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,为今后进一步分析、研究病毒蛋白的致病机制奠定了基础.

关键词：抑制性消减杂交、克隆、XTP3、反式激活

所属期刊栏目：30

分类号：R575.1;Q31.1(消化系及腹部疾病)

资助基金：国家自然科学基金C030114020;军队杰出人才基金98H038,C30070689;军队科技攻关青年基金01Q138;军队医学科研项目01B135

在线出版日期：2005-04-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：127-129