H7N9病毒的M1基因序列分析及原核表达
目的 克隆H7N9禽流感病毒M1并在原核细胞中表达,为进一步研究其生物学特性、免疫学功能及血清学检测奠定基础.方法 用PCR方法从禽流感上海分离株A/Shanghai/4664T/2013(H7N9) cDNA扩增M1基因,并克隆到载体pMD18-T中.经测序证实后,用EcoR Ⅰ/Nde Ⅰ双酶切,亚克隆到原核表达载体pET28a,并转化E.coli BL21 (DE3)菌株.取工程菌,用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE鉴定及western blot检验.结果 (1)经PCR、测序和酶切鉴定,成功克隆了禽流感H7N9 M1基因;(2)经IPTG诱导的重组质粒pET28a-M1表达出约为28 kDa的融合蛋白,与预期结果相符;(3)对H7N9型禽流感M1基因序列分析表明,与2013年暴发的H7N9型禽流感病毒M1基因核苷酸序列同源性在95.4％～100％,与2006-2011年间暴发的H7N9型流感病毒M1基因序列同源性在69.0％～89.6％,2013年感染人的H7N9型流感病毒与此前暴发的该型流感分离株属于不同的进化分支.结论 成功克隆了禽流感H7N9病毒的M1基因,并在E.coli中得以表达.
流感病毒、H7N9、M1基因、序列分析、原核表达
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R343.1;Q786(人体生物化学、分子生物学)
国家自然科学基金项目81000723
2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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