ATF6调控生殖相关基因HSPA1L表达的分子机制

摘要：

目的 探究内质网应激活化转录因子 6(ATF6)对生殖相关基因热休克蛋白A1 样蛋白(HSPA1L)表达的影响并初步阐明其调控分子机制.方法 在人胚肾细胞系HEK-293T中转染ATF6 过表达质粒,RT-qPCR和Western blot验证过表达效率;利用雄性ATF6 敲除小鼠睾丸组织转录物组测序信息,筛选ATF6 下游5 个生殖相关基因;双荧光素酶报告基因实验选择启动子活性较高的下游基因并检测过表达 ATF6 对其启动子活性的影响;通过 gene-regulation预测ATF6 和下游基因启动子可能的结合位点;RT-qPCR和Western blot检测在HEK-293T细胞中过表达ATF6 对于下游基因表达的影响;利用凝胶迁移实验(EMSA)确定ATF6 与下游基因启动子是否结合.结果 转染后HEK-293T细胞中ATF6 的mRNA(P＜0.001)和蛋白(P＜0.05)表达水平明显升高.转录物组测序及双荧光素酶报告基因实验筛选出ATF6 下游的生殖相关基因HSPA1L.ATF6 能够促进HSPA1L的截短启动子活性(P＜0.001).过表达ATF6 后,HSPA1L的表达量明显升高(P＜0.001).差异均有统计学意义.ATF6 蛋白能与HSPA1L的启动子DNA序列aagtcgtcac相结合.结论 内质网应激的关键分子ATF6 通过结合生殖相关基因HSPA1L的启动子调控后者表达水平,这将为预防或治疗与内质网应激(ERS)有关的男性不育的深入研究奠定基础.

关键词：活化转录因子6、热休克蛋白A1样蛋白、男性生殖、基因调控

所属期刊栏目：44

分类号：Q291

资助基金：国家重点研发计划2021YFC2700601

在线出版日期：2024-01-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：37-42