人ATP11A和ATP11B克隆、表达及鉴定

摘要：

目的 构建人P4型磷脂转移酶11A或11B(ATP11A或ATP11B)表达载体,并检测其上调ATP11A或ATP11B的效果.方法 根据ATP11A或ATP11B序列设计引物,克隆到克隆载体(EZ?TTM Cloning Vector)上,通过酶切鉴定,并经测序验证.分别将ATP11A和ATP11B序列酶切、定向连接到表达载体pLVX?IRES?mCherry、pLVX?IRES?RFP上.然后利用脂质体将重组带有免疫荧光蛋白的表达质粒转染至HEK?293T,最后通过测序、荧光显微镜检、流式细胞测量术分析、免疫印迹对重组细胞株进行表达验证.结果 通过电泳及酶切鉴定证实了ATP11A、ATP11B表达载体的成功构建,荧光显微镜定性观察质粒转染效率,流式细胞测量术检测转染效率分别为38.9％、41.9％,免疫印迹法只检测到转染表达质粒的细胞有标签蛋白而对照组均无蛋白表达.结论 成功构建了人ATP11A、ATP11B的表达载体,并可有效上调其表达水平,为将来应用ATP11A或ATP11B进行机制研究奠定了基础.

关键词：ATP11A、ATP11B、过表达、分子克隆

所属期刊栏目：42

分类号：Q291

资助基金：国家自然科学基金81572564

在线出版日期：2022-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：732-739