EGFR基因19外显子del18bp突变检测技术平台的构建及优化

摘要：

目的 构建高保真酶介导的EGFR基因19外显子del18bp的突变敏感性分子开关检测平台,并对其进行优化.方法 以健康人全血基因组DNA为模板,利用普通PCR与重叠PCR技术扩增分别得到包含EGFR基因19外显子del18bp的野生型和突变型DNA片段,并将其插入pMD19-T质粒,转化大肠埃希菌E.coli DH5α,通过菌液PCR及基因组测序进行鉴定.设计EGFR基因19外显子del18bp突变型特异性检测引物,并在3′端进行硫化修饰;用高保真聚合酶进行双向引物延伸.通过正交实验方案对高保真酶介导的PCR体系中的退火温度、引物浓度、模板浓度、循环数等条件进行优化,建立突变敏感性分子开关检测平台.结果 成功建立了EGFR基因19外显子del18bp突变检测技术平台.分子开关技术检测EGFR基因19外显子del18bp突变位点的最佳PCR条件为:模板浓度1.48×10-2μmol/L,引物浓度0.16μmol/L,退火温度57℃,循环数25;对突变模板的最低检出率为10-3 copies/μL.结论 高保真聚合酶偶联硫化修饰构成的突变敏感性分子开关技术可望为肺癌患者实施EGFR基因突变检测,进行个体化靶向用药提供新的技术手段.

关键词：肺癌;表皮生长因子受体(EGFR);高保真聚合酶;分子开关

所属期刊栏目：41

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：湖南省教育厅重点项目;教育部大学生创新创业训练计划项目;南华大学大学生创新创业训练计划项目

在线出版日期：2021-10-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1491-1496