小鼠生精细胞特异表达 载体AAV-Dazl-RFP-Flag的构建及表达验证

摘要：

目的 构建含有生精细胞特异启动子Dazl的真核报告基因表达载体AAV-Dazl-RFP-Flag,研究生精细胞特异启动子Dazl在生精细胞中的启动效果.方法 通过同源重组的方法 对腺相关病毒载体AAV-CMV-RFP-Flag进行改造,构建小鼠生精细胞特异表达载体AAV-Dazl-RFP-Flag.在体外,转染GC1-spg野生型细胞和HEK-293T细胞,通过免疫荧光、q-PCR、Western blot验证AAV-Dazl-RFP-Flag在体外的表达特异性.在体内,将AAV-Dazl-RFP-Flag进行腺相关病毒(AAV)包装,通过显微注射技术将AAV注射到小鼠睾丸内,通过q-PCR检测AAV-Dazl-RFP-Flag在体内的表达特异性.结果 成功构建了AAV-Dazl-RFP-Flag表达载体,并在体内、外水平验证了AAV-Dazl-RFP-Flag的表达.结论 小鼠生精细胞特异表达载体AAV-Dazl-RFP-Flag可以在生精细胞中特异性表达,为雄性生殖不育的基因治疗提供更高效的载体工具.

关键词：Dazl、启动子、基因治疗、精子发生

所属期刊栏目：40

分类号：R334(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金;国家重点实验室专项基金;山西省重点研发计划;山西省重点研发计划重点项目

在线出版日期：2020-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：753-758