LMNA突变体HEK293、 C2C12模型的构建及其核纤层蛋白A/C亚细胞定位

摘要：

目的 构建A型核纤层蛋白基因(LMNA)野生型、突变体的融合蛋白真核表达载体及LMNA突变体慢病毒载体,研究其在HEK293、C2C12中表达、核纤层蛋白A/C亚细胞定位及细胞核改变.方法 将野生型全长LMNA cDNA克隆入pEGFP-N1质粒,构建LMNA野生型质粒pEGFP-N1-LMNA,以野生型质粒为模板构建c.1117A>G定点突变质粒pEGFP-N1-LMNA-I373V.将构建的2种质粒分别转染HEK293、C2C12,用G418筛选转染的C2C12,荧光显微镜下观察细胞核形态及GFP标记的核纤层蛋白A/C亚细胞定位.以pEGFP-N1-LMNA-I373V为模板,构建pHBLV-h-LMNA-I373V-3?flag-GFP-PURO慢病毒,对慢病毒进行包装与滴度测定.pHBLV-GFP-PURO、pHBLV-LM-NA-C1117-3?flag-GFP-PURO分别转染C2C12,免疫荧光染色法观察转染后细胞核形态及核纤层蛋白A/C亚细胞定位的改变.结果 构建的pEGFP-N1-LMNA、pEGFP-N1-LMNA-I373V及pHBLV-h-LMNA-I373V-3?flag-GFP-PURO测序与目的基因序列完全一致.pEGFP-N1-LMNA转染的HEK293、C2C12核纤层蛋白A/C均匀表达于核膜下,pEGFP-N1-LMNA-I373V转染的HEK293、C2C12内核纤层蛋白A/C核内异常聚集,呈散点样分布;与HEK293相比,C2C12细胞转染效率明显降低.慢病毒转染C2C12的转染率高,突变体慢病毒转染的细胞核形态异常及核纤层蛋白A/C核内分布异常.结论 成功构建2种LMNA突变体真核表达载体及突变体转染的HEK293、C2C12模型,为LMNA突变体导致疾病的机制研究奠定科学基础.

关键词：LMNA基因、核纤层蛋白A/C、慢病毒、基因突变

所属期刊栏目：40

分类号：R746.2(神经病学与精神病学)

资助基金：江西省自然科学基金 20161BAB215192

在线出版日期：2020-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：483-489