miR-124靶向镁转运蛋白1调控活化后人T细胞功能耗竭

摘要：

目的 研究miR-124靶向镁转运蛋白1(MagT1)可否调控活化后T细胞功能耗竭.方法 1)分离外周血单个核细胞,用IFN-γ、IL-2、抗-CD3抗体、抗-CD28抗体和IL-1α 活化T细胞;流式细胞仪检测T细胞活化标记分子CD25和CD69所占的比例.2)构建miR-124/miR-124 sponge慢病毒载体;包装慢病毒后感染活化T细胞,用RT-qPCR检测感染后T细胞内miR-124和MagT1基因表达.3)生物信息学分析miR-124与MagT1的靶向位点,并用双荧光素酶报告基因系统鉴定.4)Western blot法检测慢病毒感染前后T细胞MagT1和PD-1蛋白水平.5)CCK8法检测慢病毒感染前后T细胞增殖能力;ELISA法检测细胞T分泌细胞因子TNF-α 和TGF-β 的能力.结果 流式细胞仪检测表明T细胞活化成功.RT-qPCR检测表明慢病毒构建成功,miR-124/miR-124 sponge载体分别显著上调或下调miR-124的表达(P<0.01).双荧光素酶报告基因系统证实miR-124靶向MagT13′UTR并抑制其表达.Western blot表明miR-124过表达组MagT1蛋白水平低于对照组(P<0.05),PD-1蛋白水平高于对照组(P<0.05),抑制miR-124后,MagT1蛋白水平高于对照组(P<0.05),PD-1蛋白水平低于对照组(P<0.05).miR-124过表达使T细胞增殖能力和分泌TNF-α 能力显著降低,而抑制miR-124使T细胞增殖能力和分泌TGF-β 能力显著升高(P<0.01).结论 miR-124可以负向调节靶基因MagT1的表达,并对活化后T细胞功能耗竭具有重要的调节作用.

关键词：微小RNA-124、镁转运蛋白1、T细胞耗竭

所属期刊栏目：39

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：湖北省卫生健康委员会面上项目WJ2019M263

在线出版日期：2019-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1404-1409