人ADAM17启动子荧光素酶报告质粒的构建与鉴定

摘要：

目的 构建人去整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)启动子的荧光素酶报告质粒,对不同位点进行定点突变,分析其转录活性.方法 通过生物信息学分析ADAM17启动子区域的叉头转录因子M1(FoxM1)结合位点,以人胃癌细胞系MGC-803基因组为模板,PCR扩增ADAM17基因启动子-1365～+51片段,连接到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中;对FoxM1结合的3个位点进行定点突变;转染至293T细胞后用双荧光素酶报告系统分析其转录活性.结果 测序结果显示,ADAM17启动子荧光素酶报告基因及其突变体均构建成功;与pGL3-basic组相比,pGL3-ADAM17(-1365～+51)组介导的荧光素酶活性明显升高(P<0.05);与对照组相比,过表达FoxM1组介导的荧光素酶活性明显升高(P<0.05),且pGL3-ADAM17(-1365～+51)组高于突变组(P<0.05).结论 成功构建了人ADAM17启动子荧光素酶报告基因及其突变体,初步验证了ADAM17受转录因子FoxM1的转录调控.

关键词：去整合素-金属蛋白酶17、启动子、荧光报告质粒、叉头转录因子M1

所属期刊栏目：39

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：上海市嘉定区卫计委资助项目2017-QN-06

在线出版日期：2019-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1305-1309