重组人烯醇酶-α的原核表达及生物信息学分析

摘要：

目的 通过原核表达技术获得人烯醇酶-α(ENO1)重组蛋白,并对表达产物进行生物信息学分析及抗体结合测定,为应用血清学检测技术进行肝纤维化早期诊断奠定基础.方法 根据GenBank中登录的ENO1序列(cDNA clone BC015641,MGC:23319 IMAGE:4643088),设计特异性引物,以ENO1的cDNA为模板,用PCR技术扩增ENO1序列,构建该基因的克隆载体pEASY-T1/ENO1及表达载体pET-32a(+)/ENO1,通过IPTG诱导表达重组蛋白rENO1.利用生物信息学相关软件(ProtParam、ProtScale、SignalP 4.1 server、Signal-3L、TMpred、DAS、NetPhos 2.0 Server)分析人ENO1蛋白的理化性质、信号肽、跨膜域及磷酸化位点等信息,并通过Western blot检测其与相应抗体的反应性.结果 成功构建重组质粒pEASY-T1/ENO1及表达载体pET-32a(+)/ENO1,构建的克隆质粒测序结果与GenBank中登录的ENO1序列的比对符合率为100％.获得的ENO1融合蛋白分子质量约为67 ku.该ENO1片段由434个氨基酸组成,其相对分子质量为47168.96,理论pI为7.01,是一种稳定的亲水性蛋白.该蛋白与相应抗体具有良好的反应性.结论 重组人烯醇酶-α 可以通过原核表达技术获得.获得的烯醇酶-α 融合蛋白片段为稳定的亲水性胞外蛋白,可以与相应抗体反应,为其作为相关标志物用于肝纤维化的早期快速诊断奠定基础.

关键词：烯醇酶-α、原核表达、生物信息学

所属期刊栏目：39

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：大连市医药卫生科学计划1511015

在线出版日期：2019-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1300-1304