CRISPR质粒和同源重组模板的共转染可降低CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率

摘要：

目的 探讨CRISPR质粒和同源重组模板的共转染对CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率的影响以及可行的解决办法.方法 用T7E1内切酶实验和RT-qPCR检测只转染CRISPR质粒组和质粒和模板共转染组细胞内Cas9的切割效率,Cas9 RNA和DNA水平的差异;RT-qPCR检测降低共转染的模板DNA的数量时,细胞内Cas9 DNA和RNA水平的变化;RT-qPCR和T7E1内切酶实验检测先转染CRISPR质粒后转染同源重组模板时,细胞内Cas9 DNA和RNA水平以及切割效率的变化.结果 与只转染CRISPR质粒组相比,CRISPR质粒和同源重组模板的共转染显著降低了CRISPR质粒的转染效率(P<0.001)和Cas9的切割效率(P<0.001).而先转染质粒后转染同源重组模板组和只转染质粒组在CRISPR质粒的转染效率和Cas9的切割效率差别无统计学意义.结论 CRISPR质粒和同源重组模板的共转染降低了CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率,而先转染质粒后转染同源重组模板可以解决这一问题.

关键词：CRISPR/Cas9系统、共转染、分开转染、同源重组模板

所属期刊栏目：39

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：中国医学科学院医学与健康科技创新工程2017-I2M-B&R-04;中国医学科学院医学表观遗传中心基金2017PT31035

在线出版日期：2019-07-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1048-1054