人跨膜蛋白39A原核表达载体构建、条件优化及可溶性表达

摘要：

目的 构建人跨膜蛋白39A基因(TMEM39A)的原核表达载体,优化表达条件并获得可溶性表达的TMEM39A.方法 以HEK293细胞的总RNA为模板,反转录PCR扩增TMEM39A,构建其原核表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A,并在不同温度、IPTG浓度、A600nm值及时间条件进行诱导表达,然后利用上述获得的最佳诱导条件进行大量表达,分析其可溶性和抗原性.结果 重组表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A与GenBank中的TMEM39A(登录号:BC021277.2)的核苷酸序列同源性为99.9％,氨基酸序列同源性为100％.重组蛋白GST-TMEM39A在69和60 ku处出现两条特异性条带,采用单因素方法对不同温度、IPTG浓度、A600nm值及时间进行分析得出GST-TMEM39A的最佳诱导条件为25℃、A600nm值为0.6～0.8、IPTG浓度为0.1 mmol/L诱导9 h;在此基础上进行大量表达,并以可溶性形式获得了TMEM39A与GST蛋白的融合表达.结论 成功构建了TMEM39A的原核表达载体,确定了GST-TMEM39A的最佳表达条件并实现其的可溶性表达,为后续纯化TMEM39A、制备抗体开展功能研究奠定物质基础,并为深入探讨TMEM39A与许多疾病或病毒的关系提供科学依据.

关键词：跨膜蛋白39A、条件优化、融合蛋白、可溶性表达

所属期刊栏目：39

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金31460665;教育部"创新团队发展计划"IRT_17R88;西北民族大学"双一流"引导专项生物工程特色学科10018703,1001070204

在线出版日期：2019-07-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：932-936