原核表达及一步法制备可溶性白喉毒素突变体CRM197

摘要：

目的 构建一种新型的重组蛋白大肠杆菌胞内自动切割表达系统表达可溶性的CRM197重组蛋白,实现一步法纯化.方法 将CRM197编码序列与硫氧还蛋白(Trx)序列融合并克隆于原核表达载体pET-32a(+)载体上, Trx与CRM197之间加入HRV3C(人鼻病毒3C)蛋白酶识别区序列和组氨酸纯化标签编码序列,HRV3C蛋白酶基因克隆于原核表达质粒pGArasd,共同转化大肠杆菌Origami B (DE3),15 ℃温和诱导,并使用Ni-NTA基质亲和纯化CRM197重组蛋白.结果 CRM197融合蛋白表达后,随即被伴随表达的HRV3C蛋白酶水解释放出游离的带His标签的CRM197重组蛋白,经过一步法亲和纯化,得到纯度约95%的CRM197样品.与DNA共同孵育,显示所获CRM197重组蛋白具有脱氧核糖核酸酶活性.结论 通过构建新型的双质粒自动切割原核表达系统,简化了在大肠杆菌表达纯化可溶性CRM197重组蛋白的工艺,降低了制备成本.

关键词：白喉毒素突变体、可溶性表达、自动切割、纯化

所属期刊栏目：38

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：中国医学科学院医学与健康科技创新工程2017-I2M-3-022

在线出版日期：2018-06-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：815-820