基于CRISPR/Cas9系统的HEK293T细胞DMD基因第51号外显子的靶向敲除

摘要：

目的 应用CRISPR/Cas9基因编辑技术,完成HEK293T细胞中DMD基因第51号外显子(exon51)高效的靶向敲除.方法 设计靶向人DMD基因exon515′端及3′端的sgRNA并克隆至CRISPR/Cas9载体质粒PX459中,转染至HEK293T细胞后,提取基因组DNA并使用Surveyor法检测切割活性;使用目标外显子两端切割活性最高的sgRNA构建PX459-2sgRNA质粒,转染至HEK293T细胞后用PCR及T载体测序检测靶向外显子切除情况.结果 50%的HEK293T细胞中DMD基因 exon51被定向切除,编辑效率较高.结论 建立使用CRISPR/Cas9单质粒敲除人DMD基因 exon51的平台,为DMD及其他遗传病的基因治疗研究奠定实验基础.

关键词：CRISPR/Cas9、DMD基因、单载体质粒、HEK293T细胞、外显子敲除

所属期刊栏目：38

分类号：R394.3

资助基金：2016年度河南省产学研合作项目162107000017

在线出版日期：2018-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：375-380