TRPC1/ORAI1复合体调节HUVECs SOC和ROC介导的Ca2+内流和NO生成

摘要：

目的 研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)/钙释放激活钙通道调节分子1(ORAI1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HUVECs) 钙池操纵性钙通道(SOC) 和受体操纵性钙通道(ROC)介导Ca2+内流和NO生成中的作用.方法 取2~3代HUVECs,将构建的TRPC1和ORAI1干扰质粒分别转染入HUVECs.用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果,real-time PCR和Western blot检测TRPC1、ORAI1 mRNA和蛋白的表达及抑制效率.细胞随机分组:特异性质粒转染组即实验组,未转染组即空白对照组及空质粒组(vehicle组),将上述3组细胞分别与CaR激动剂、ROC模拟剂TPA+CaR负性变构调节剂Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220、经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967孵育,用荧光探针Fura-2/AM及DAF-FM负载方法 同步检测[Ca2+]i和NO.随后将构建的TRPC1和ORAI1干扰质粒同时转染入HUVEC,与CaR激动剂孵育后检测[Ca2+]i和NO,用免疫共沉淀法检测TRPC1和ORAI1的相互作用.结果 1)与对照组相比,TRPC1及ORAI1组,mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05);2)在4种不同处理作用下,TRPC1及ORAI1转染组中细胞内Ca2+浓度变化值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);3)与对照组及单转染TRPC1及ORAI1组比,共转染组细胞内Ca2+浓度变化值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);4)TRPC1与ORAI1相互作用形成复合体,且在CaR激动剂的剌激下相互作用增强.结论 TRPC1与ORAI1复合体共同调节CaR经SOC和ROC激活介导的Ca2+内流和NO生成.

关键词：TRPC1、ORAI1、一氧化氮、钙离子、人脐静脉内皮细胞

所属期刊栏目：37

分类号：R363(病理学)

资助基金：国家自然科学基金31160239,81160018

在线出版日期：2017-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：696-704