以PPARγ2为靶点的传统中药细胞学筛选方法的建立和应用

摘要：

目的 构建含人PPARγ2基因启动子的荧光素酶表达质粒,通过建立稳定转染该质粒的细胞系,建立传统中药细胞学筛选方法.方法 首先以pGL3-Basic-Luc和pGL3-Enhancer-Luc为载体构建含不同长度人PPARγ2基因启动子序列的荧光素酶表达质粒.脂质体转染,建立稳定转染上述质粒的3T3-L1细胞系.选取红花和茜草等28种可能具有减肥作用的中药制备成中药水溶性提取物(ECMH),观察不同浓度 ECMH对3T3-L1细胞中荧光素酶表达的影响.结果 pGL3-Enhancer-PPARγ2 625 bp-Luc质粒稳定转染的细胞荧光素酶表达最高,是本底的200倍左右.故采用此细胞系进行传统中药筛选,红花ECMH在10、100和1 000 μg/mL时均可使3T3-L1细胞中荧光素酶的表达明显增加,分别为对照组的1.63倍、1.90倍和2.30倍(P<0.05).在10~1 000 μg/mL荷叶、茜草ECMH也均能促进3T3-L1细胞中荧光素酶的表达,在浓度为1 000 μg/mL时荷叶和茜草对3T3-L1细胞中荧光素酶的表达作用最强,分别为对照组的2.03倍(P<0.01)和2.00倍(P<0.01).结论 成功构建pGL3-Enhancer-PPARγ2 625 bp-Luc质粒,并建立稳定转染的3T3-L1细胞系.红花、荷叶和茜草的ECMH能明显促进3T3-L1细胞中人PPARγ2基因启动子的活性,它们可能成为未来潜在的减肥药物.

关键词：过氧化物酶体增生物激活受体γ2、中药水溶性提取物、质粒构建、稳定转染、3T3-L1前脂肪细胞

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分类号：R58(内分泌腺疾病及代谢病)

资助基金：国家自然科学基金30540036,30771026,81370898;北京市自然科学基金7082079,7122146;国家临床重点专科建设项目WBYZ2011-873;北京协和医院基金PUMCH 2013-020

在线出版日期：2017-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：619-624