BCR-ABL SH3-T79Y突变体 重组腺病毒载体的构建及促进白血病K562/G01细胞凋亡

摘要：

目的 探讨构建BCR-ABL SH3-T79Y突变体(简称SH3-T79Y突变体)的重组腺病毒载体及其对白血病耐药细胞株K562/G01细胞凋亡的影响.方法 以pMig210质粒为模板,用重叠延伸PCR扩增SH3-T79Y突变体片段,将其克隆入重组腺病毒载体,通过鉴定、包装、扩增后得到含SH3-T79Y突变体的重组腺病毒.将重组腺病毒感染白血病K562/G01细胞株,测定其感染效率,瑞氏染色检查细胞形态学,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测BCR-ABL、CrkL磷酸化及总蛋白水平.结果 重组腺病毒载体构建成功.SH3-T79Y突变体转染K562/G01细胞株72 h效率大于80%,可见明显的凋亡小体、核聚集等凋亡现象,凋亡率为32.46%,较对照组显著增加(P<0.05);明显抑制BCR-ABL和CrkL的磷酸化水平,降低BCR-ABL总蛋白表达(P<0.05).结论 成功构建SH3-T79 Y突变体重组腺病毒载体,并证实其通过抑制BCR-ABL及底物CrkL磷酸化水平促进K562/G01细胞凋亡.

关键词：慢性粒细胞白血病、BCR-ABL SH3突变体、重组腺病毒、K562/G01细胞

所属期刊栏目：37

分类号：R733.72(肿瘤学)

资助基金：重庆医科大学2012年优秀博士学位论文科研经费重医大研[2012]27号

在线出版日期：2017-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：369-375